![3-[(R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-胺](https://cimg.cphi.cn/img_Cphi_cn/Product/2023_05/Mimg_2305220225307129.png!250)
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描述：Crizotinib是有效的 c-Met 和 ALK 抑制劑，在細(xì)胞試驗(yàn)中的 IC50 值分別為11 nM 和 24 nM
相關(guān)類別：
信號(hào)通路 >> 蛋白酪氨酸激酶 >> ALK
信號(hào)通路 >> 自噬 >> 自噬
信號(hào)通路 >> 蛋白酪氨酸激酶 >> c-Met的/HGFR
研究領(lǐng)域 >> 癌癥
靶點(diǎn)：IC50: 11 nM (c-Met), 24 nM (ALK)
體外研究：PF-2341066在mIMCD3小鼠或MDCK犬上皮細(xì)胞中顯示出相似的針對(duì)c-Met磷酸化的效力，IC50分別為5nM和20nM。與NIH3T3細(xì)胞相比，PF-2341066顯示出針對(duì)NIH3T3細(xì)胞的改善或相似的活性，所述NIH3T3細(xì)胞經(jīng)工程改造以表達(dá)c-Met ATP結(jié)合位點(diǎn)突變體V1092I或H1094R或P-環(huán)突變體M1250T，IC50分別為19nM，2nM和15nM。表達(dá)野生型受體，IC50為13 nM。相反，與野生型受體相比，觀察到針對(duì)經(jīng)工程改造以表達(dá)c-Met活化環(huán)突變體Y1230C和Y1235D的細(xì)胞的PF-2341066效力的顯著變化，IC50分別為127nM和92nM。 PF-2341066還有效地阻止了NCI-H69和HOP92細(xì)胞中c-Met的磷酸化，IC50分別為13 nM和16 nM，分別表達(dá)內(nèi)源性c-Met變體R988C和T1010I [1]。 PF-2341066還有效抑制Karpas299或SU-DHL-1 ALCL細(xì)胞中的NPM-ALK磷酸化，IC50為24 nM。 PF-2341066有效阻止細(xì)胞增殖，這與ALK陽(yáng)性ALCL細(xì)胞中G（1）-S期細(xì)胞周期停滯和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)，IC50為30 nM，而ALK陰性淋巴瘤細(xì)胞則不然[2]。此外，PF-2341066可預(yù)防與原發(fā)腫瘤生長(zhǎng)（即增殖和存活）以及轉(zhuǎn)移相關(guān)的骨肉瘤行為
體內(nèi)研究：PF-2341066顯示在50 mg / kg /天和75 mg / kg /天治療隊(duì)列中引起大規(guī)模腫瘤（> 600 mm3）明顯消退的能力，平均腫瘤體積減少60％。 GTL-16模型中的日常管理計(jì)劃。在另一項(xiàng)研究中，PF-2341066顯示出完全抑制GTL-16腫瘤生長(zhǎng)> 3個(gè)月的能力，12個(gè)小鼠中只有1只在3個(gè)月的治療方案中顯示出50mg / kg /的腫瘤生長(zhǎng)顯著增加。天。在GTL-16腫瘤中觀察到12.5mg / kg /天，25mg / kg /天和50mg / kg /天的CD31陽(yáng)性內(nèi)皮細(xì)胞的顯著劑量依賴性減少，表明MVD的抑制顯示劑量與抗腫瘤療效的相關(guān)性。 PF-2341066在GTL-16和U87MG模型中顯示出人類VEGFA和IL-8血漿水平的顯著劑量依賴性降低。 po給予PF-2341066后，在GTL-16腫瘤中觀察到磷酸化c-Met，Akt，Erk，PLCλ1和STAT5水平的顯著抑制[1]。 PF-2341066可預(yù)防與原發(fā)性腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移相關(guān)的骨肉瘤行為。在通過(guò)口服強(qiáng)飼法用PF-2341066處理的裸鼠中，PF-2341066預(yù)防了骨肉瘤異種移植物的生長(zhǎng)和相關(guān)的骨溶解和皮層外骨基質(zhì)的形成[3]。用50mg / kg PF-2341066處理c-MET-擴(kuò)增的GTL-16異種移植物引起腫瘤消退，其與18F-FDG攝取的緩慢減少和降低葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1，GLUT-1的表達(dá)相關(guān)
激酶實(shí)驗(yàn)：將細(xì)胞接種于96孔板中的補(bǔ)充有10％胎牛血清（FBS）的培養(yǎng)基中，并在24小時(shí)后轉(zhuǎn)移至無(wú)血清培養(yǎng)基[含0.04％牛血清白蛋白（BSA）]。在研究配體依賴性RTK磷酸化的實(shí)驗(yàn)中，添加相應(yīng)的生長(zhǎng)因子長(zhǎng)達(dá)20分鐘。在用PF-2341066孵育細(xì)胞1小時(shí)和/或適當(dāng)?shù)呐潴w指定時(shí)間后，用補(bǔ)充有1mM Na 3 VO 4的HBSS洗滌細(xì)胞一次，并從細(xì)胞產(chǎn)生蛋白質(zhì)裂解物。隨后，通過(guò)夾心ELISA方法評(píng)估所選蛋白激酶的磷酸化，使用用于包被96孔板的特異性捕獲抗體和對(duì)磷酸化酪氨酸殘基特異的檢測(cè)抗體。將抗體包被的平板（a）在蛋白質(zhì)裂解物存在下于4℃溫育過(guò)夜; （b）在PBS中的1％吐溫20中洗滌7次; （c）在辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的抗 - 總 - 磷酸酪氨酸（PY-20）抗體（1：500）中孵育30分鐘; （d）再次洗七次; （e）在3,3'，5,5'-四甲基聯(lián)苯胺過(guò)氧化物酶底物中溫育以引發(fā)比色反應(yīng)，通過(guò)加入0.09N H 2 SO 4終止反應(yīng); （f）使用分光光度計(jì)測(cè)量450nm的吸光度
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：在補(bǔ)充有10％FBS（生長(zhǎng)培養(yǎng)基）的培養(yǎng)基中以低密度將腫瘤細(xì)胞接種在96孔板中，24小時(shí)后轉(zhuǎn)移至無(wú)血清培養(yǎng)基（0％FBS和0.04％BSA）。向每個(gè)孔中加入適當(dāng)?shù)膶?duì)照或指定濃度的PF-2341066，并將細(xì)胞溫育24至72小時(shí)。將人臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）以每孔> 20,000個(gè)細(xì)胞接種于EGM2培養(yǎng)基中的96孔板中5至6小時(shí)，并轉(zhuǎn)移至無(wú)血清培養(yǎng)基中過(guò)夜。第二天，向每個(gè)孔中加入適當(dāng)?shù)膶?duì)照或指定濃度的PF-2341066，并在孵育1小時(shí)后，將HGF以100ng / mL加入指定的孔中。進(jìn)行3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化物測(cè)定以確定相對(duì)腫瘤細(xì)胞或HUVEC數(shù)
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：攜帶異種移植物（300-800mm 3）的無(wú)胸腺小鼠通過(guò)口服強(qiáng)飼法在指定劑量水平下給予PF-2341066水溶液。在施用PF-2341066后的指定時(shí)間，對(duì)小鼠進(jìn)行人道安樂(lè)死，并切除腫瘤。將腫瘤快速冷凍并使用液氮冷卻的cryomortar和研杵進(jìn)行粉碎，產(chǎn)生蛋白質(zhì)裂解物，并使用BSA測(cè)定法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。使用捕獲ELISA或免疫沉淀 - 免疫印跡方法測(cè)定總蛋白和磷酸化蛋白的水平
密度：1.5±0.1 g/cm3
沸點(diǎn)：599.2±50.0 °C at 760 mmHg
分子式：C21H22Cl2FN5O
分子量：450.337
閃點(diǎn)：316.2±30.1 °C
精確質(zhì)量：449.118530
PSA：77.99000
LogP：4.73
蒸氣壓：0.0±1.7 mmHg at 25°C
折射率：1.673
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