引言：雙特異性抗體（bispecific antibodies, bsAbs）是一類能夠同時(shí)靶向兩個(gè)不同抗原表位的治療性抗體。相較于傳統(tǒng)單克隆抗體（mAb），bsAbs在腫瘤免疫治療、自身免疫性疾病和感染性疾病中展現(xiàn)出更高的特異性和更低的副作用風(fēng)險(xiǎn)。截至2025年，全球已有14款bsAb藥物獲批上市，另有數(shù)百種處于臨床前研究階段。然而，bsAb的復(fù)雜結(jié)構(gòu)（圖1）使其下游純化面臨巨大挑戰(zhàn)：
本文將系統(tǒng)解析bsAb純化的核心策略，涵蓋捕獲層析、雜質(zhì)去除技術(shù)及未來(lái)發(fā)展方向，為生物制藥工藝開發(fā)提供全面指導(dǎo)。
圖1 | 雙特異性抗體的結(jié)構(gòu)分類：對(duì)稱型與非對(duì)稱型、IgG樣與非IgG樣結(jié)構(gòu)。
一、捕獲層析：從Protein A到新型技術(shù)
1.1 傳統(tǒng)親和層析：Protein A的黃金標(biāo)準(zhǔn)
Protein A親和層析是bsAb捕獲的核心技術(shù)，其通過(guò)結(jié)合抗體的Fc區(qū)域?qū)崿F(xiàn)高特異性捕獲。近年來(lái)，高載量樹脂（如MabSelect PrismA）的研發(fā)顯著提升了效率：
局限性：
1.2 非Fc依賴型捕獲技術(shù)
對(duì)于缺乏Fc區(qū)域的非IgG樣bsAb，需采用輕鏈（LC）靶向親和層析：
1.3 混合模式層析：新一代捕獲方案
混合模式層析結(jié)合離子交換、疏水作用等多機(jī)制，展現(xiàn)出獨(dú)特優(yōu)勢(shì)：
創(chuàng)新應(yīng)用：
圖2 | 典型下游純化流程：捕獲、低pH病毒滅活、精純、病毒過(guò)濾等步驟。
二、產(chǎn)物相關(guān)雜質(zhì)去除策略
2.1 同源二聚體：結(jié)構(gòu)錯(cuò)配的克星
2.1.1 親和層析差異化捕獲
2.1.2 離子交換層析電荷調(diào)控
2.1.3 混合模式層析多維分離
圖3 | 不同親和層析配體的結(jié)合位點(diǎn)：Protein A（Fc）、MabSelect PrismA（Fc+VH3）、KappaSelect（κ輕鏈）等。
2.2 片段雜質(zhì)：從半抗體到單臂片段
2.2.1 親和層析精準(zhǔn)去除
2.2.2 混合模式層析高效精純
2.3 聚集體：免疫原性的隱形殺手
2.3.1 親和層析洗脫優(yōu)化
2.3.2 混合模式層析多維清除
圖4 | 產(chǎn)物相關(guān)雜質(zhì)類型：同源二聚體、半抗體、聚集體等。
三、工藝相關(guān)雜質(zhì)清除技術(shù)
3.1 宿主細(xì)胞蛋白（HCP）
3.1.1 層析與深度過(guò)濾聯(lián)用
3.1.2 上游工藝聯(lián)動(dòng)
3.2 病毒安全：從滅活到過(guò)濾
3.2.1 低pH滅活
3.2.2 層析與膜過(guò)濾
3.3 內(nèi)毒素：電荷差異的利用
四、工藝整合與未來(lái)展望
4.1 經(jīng)典流程 vs 創(chuàng)新模式
圖7 | （A）經(jīng)典流程；（B）混合模式替代離子交換；（C）混合模式替代Protein A。
4.2 技術(shù)前沿：數(shù)字化與連續(xù)生產(chǎn)
五、結(jié)語(yǔ)
雙特異性抗體的下游純化是一場(chǎng)特異性與效率的博弈。從Protein A的黃金標(biāo)準(zhǔn)到混合模式層析的創(chuàng)新突破，從同源二聚體的精準(zhǔn)分離到病毒安全的全面保障，每一步技術(shù)進(jìn)步都在推動(dòng)bsAb藥物的臨床轉(zhuǎn)化。未來(lái)，隨著AI與連續(xù)生產(chǎn)技術(shù)的深度融合，抗體純化將邁向更高純度、更低成本的智能化時(shí)代。
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